一，简述

本试验方法是基于当实验室离心机操作和试验时，将吊篮或转头的密封圈暴露在密集的细菌孢子悬浮液上来观察是否有细菌孢子逸出。在按照制造商的说明书和按照处理危险生物材料相关的良好实验室习惯进行操作时，设计本试验在可能发生的预见事件期间，全面考验密封圈的设计

二，执行标准

GB 4793.7—2008附录AA

IEC61010-2-020:2006

三，设备构成

离心机（客户自配）；

试验箱：完全密封功能，排风功能，高效过滤功能；

熏蒸功能

四，技术参数

控制系统：PLC;

操作界面：彩色7寸威纶通，中英文切换；

试验箱：2.8 m³/min 速率抽气的排风扇；

悬浮液：枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢（客户自备）；

无菌琼脂皿10只；

熏蒸剂客户自备；

五，操作流程

试验悬浮液

试验生物体的孢子的水状悬浮液即枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢(参见 B.atrophaeus Nakamura 或 B.globigii)含≥1×101° spores/mL。

5.1 试验皿

装有适合试验生物体生长介质的无菌琼脂皿。通过从100 spore/mL～1000   spore/mL 的悬浮液

中取出0. 1 mL, 精度±30%,倒在两块琼脂平板上，在这批琼脂平板上应该能够培养试验微生物的低 浓度。

5.2 取样设备

对于所有的实验室离心机，取样设备包括为取样表面准备的用无菌水弄湿的无菌棉签。

5.3 熏蒸设备

每个单独的试验后，应该对设备的试验箱及其内部进行适当熏蒸，从而杀死试验悬浮液残留的孢 子。在试验前通过确保转头或试验箱没有背景污染来验证熏蒸的效果。应该注意保证在试验进行前熏 蒸剂充分挥发。试验箱的通风系统是关闭的，经过与试验时间相同的时间之后，测量熏蒸剂的浓度。如 果熏蒸剂的浓度可测得(在23℃甲醛>2.44 mg/m³ 的情况下),则要推迟进行试验，并继续通风，直到

浓度下降为止。

注：吸人熏蒸剂是有毒的，应该注意避免人员暴露在蒸汽中，并且在蒸汽的后续处理中也应避免人员暴露。

5.4样品评价

在试验皿表面培养所有的菌种。用棉签擦拭试验皿表面，将该试验皿在37℃下进行18 h～24 h 的有氧细菌培养。通过橙黄色来辨认枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢菌落，以菌落形成的单位进行记录。

5.5试验规程

AA.5.1  试验悬浮液的检查

每次试验之前，将试验悬浮液的适当稀释物涂在试验皿上，立即进行试验。

AA.5.2  试验方法

AA.5.2.1  试验次数

对每个吊篮或转头进行三次独立的试验，每次独立的试验都要对吊篮或转头的密封圈进行试验。 试验前要按照规定进行对照样品的取样。

AA.5.2.2   固定角度的转头试验方法

将试验悬浮液装入受试转头的容器内，不加盖或不密封地放置在转头的每个位置。按照制造商的 使用说明书，将所有转头位置上的容器达到其额定容量。

用吸管把另外的试验悬浮液小心滴入转头中间，以模拟一个“洒落”。如果可能，在没有溢出转头的 情况下，“洒落”量应该等于或大于上限为5 mL 的一个容器的容量，或者对于具有较大容量容器的转 头，洒落量应该是5 mL 或一个容器容量的10%,取其较大者。如果使用量小于用来模拟“洒落”试验 悬浮液的满容量，则必须做记录。

如果使用过滤器作为斜角式转头的主要防护模式，那么使用的吊篮密封试验方法。

AA.5.2.3   吊篮密封方法

对于密封的吊篮和过滤器，需要一种不同的试验方法。吊篮按其额定容量装有试验悬浮液。盖上 盖子以后，吊篮缓慢倒置两次，以使试验悬浮液落在吊篮封口内侧上。

注：由于吊篮和转头有多种设计，上述试验方法也许不太适合所有的设计。在这些情况下可能需要开发其他方法 以达到同样的效果，例如按照制造商的说明书考验使用的密封圈。

AA.5.2.4  对照样品

每次试验之前进行表面取样来测量试验微生物的背景污染。首先，在O型密封圈内侧进行表面取 样。在试验悬浮液装入吊篮或转头以后，在吊篮或转头的密封圈的整个外侧进行表面取样，并在离心腔 内侧周边的多个点进行表面取样，其高度是实验室离心机正在运行时的吊篮或转头密封圈的高度。当 试验一个密封的吊篮时，从转头的表面取样。对于密封的吊篮或过滤器，在吊篮倒置以后，用棉签对封 口进行附加的取样。也可在有潜在污染的地方用棉签取样。

AA.5.2.5  离心

在取得对照样品之后 加速到实验室离心机受试旋转组件的最大转速，并在该转速 保持5 min, 然后减速到停。

实验室离心机停止后，打开机盖，用棉签从对照样品的取样部位取样

AA.5.2.6  消毒

每次试验之后，对试验箱及其内部通过熏蒸进行消毒，对试验箱用排风扇彻底通风。 对受试吊篮或转头按照制造商推荐的方法进行消毒。

5.6合格与不合格的标准

对每个转头或吊篮进行三次独立的、有效的试验。每次独立的试验都通过，才能算作合格，其中任 意一个单独的有效试验不通过都会导致整体不合格。

只有在下述两种情况之一时试验才有效，加入最大量的附加试验悬浮液，或 者如果离心后立即从密封圈内取出菌落形成单位>1×103 的样本，在同一位置的该样品的菌落形成单 位大于对照样品。

对于三个单独的试验，离心作用后，通过擦拭回收的(在吊篮或转头的密封圈内的除外)菌落形成单 位的数量不得超出在试验前收集的对照样品中回收数量1个菌落形成单位(在数量非常低时，允许采样 误差)。如果在任何对照样品中检测到超过5个菌落形成单位的数量，那么该试验是无效的，应该重新 进行试验。